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我国医学真菌学发展与展望

作者:张海龙 黄颋 编辑

      随着生物界分类学的发展,作为第三界的真菌已与动物、植物并列为菌物界,医学真菌虽只占其中少数,但真菌引起的疾病在皮肤科门诊病人中高达1/4以上,而其它科如感染、肿瘤、血液等部门并发深部或浅部真菌感染者亦屡见不鲜。据初步统计,20年来患者增长3~5倍。目前医学真菌学已正式列为一独立学科,在三级甲等医院已陆续成立专科。但从其初创直至发展壮大主要是近数十年的事。现将40年来我国医学真菌学的主要成就及今后的发展方向,简述于后。

  一、真菌病的病原学方面

  头癣是50~60年代浅部真菌病的重点,经大规模防治大大降低了发病率后,许兰氏黄癣菌及其变种所致黄癣(60年代占头癣致病菌的73.3%),除新疆等少数地区外,几乎难以见到。60年代分别占19.4%及7.3%的铁锈色小孢子菌和紫色毛癣菌所致头癣也已少见。目前头癣的主要病原菌为犬小孢子菌(约占白癣致病菌86%)及少数断发毛癣菌(黑癣)。吴绍熙等首先发现红色毛癣菌所致头癣,并从电镜证实该菌可致发内感染,同时发现耐灰黄霉素的黄癣菌及紫色毛癣菌,并提出病原真菌在药物治疗下可产生耐药株。

  关于我国浅部真菌病的病原菌,从1986年全国28个省、市、自治区联合调查9139株菌分析,提示我国以红色毛癣菌居首位(54.4%),石膏样毛癣菌次之(19.1%),以下为紫色癣菌(6.4%)与白念珠菌(6.3%)。有鉴于此,秦启贤在分析22433例皮肤癣菌病的临床及菌学后认为红色癣菌不但引起浅部感染,还可引起深在感染,如发生脓癣、脓肿、肉芽肿,疣状增生等,是我国乃至世界各国现阶段流行最广的一种皮肤癣菌,因而提出将皮肤癣菌病按病原菌命名为红色毛癣菌病,对目前按解剖部位命名的方法提出了新的见解。

  随着抗生素、免疫抑制剂等广泛应用,真菌病的发病率逐年增高。且除常见致病真菌感染外,不少新的条件致病菌和新纪录菌感染迭有发现。自1976年秦启贤首先报告江西2例蛙粪霉菌致皮下组织藻菌病后,国内首见感染病例报道陆续增多,如鼻孢子菌病(李新章);烟曲菌致小腿慢性溃疡,疣状瓶霉致着色真菌病,猪小孢子菌致脓癣,串珠镰刀菌致皮肤肉芽肿,不育大孢子菌致肺炎(吴绍熙);新型隐球菌上海变种致脑膜炎,黄曲菌及构巢裸壳孢菌肺炎,光滑球拟酵母致膀胱炎,顶端头孢霉白毛结节病与涎沫念珠菌致股癣型念珠菌病,束状刺盘孢霉致角膜炎(廖万清);微小根毛霉致肺结合菌感染(陈世平);暗纹节菱孢(球形阜孢霉)致皮下结节与永久性班秃(赵玉明);棘状外瓶霉(戴文丽)及葡萄状佛隆那菌(张合恩)致暗色丝孢霉病;禾谷镰刀菌致皮肤肉芽肿(张北川);杜波型组织胞浆菌病(张长法);播散型青霉菌病(李菊裳);链隔孢霉致甲癣(李秀凯);芽生菌病(郭润身);粉小孢子菌体癣等(陈瑞娥)等。

  随着对真菌学的深入研究,近年来对真菌的特性也有更多了解,从而对真菌的分类学、生态学的发展提供了信息,如万俊增等发现皮炎瓶霉具耐高温特性,45±1℃下仍可生长繁殖,直至90℃10分钟才致死。这点可与形态相似的高氏瓶霉只在37℃下生长作鉴别,并为疫区预防提供依据。程培华等也发现假丝酵母菌可耐43℃温度及30%含盐环境,田家琦发现电镜下在病变内的孢子丝菌有变性改变,提示机体的天然防御作用。王端礼以扫描电镜研究皮炎外瓶霉的产孢细胞顶端与侧面均为2~5个环痕尖端,可作为与甄氏外瓶霉的鉴别,并否定了西村和子等认为以环痕尖端系偶然发生的论点。金学洙等以单孢子培养法研究了犬小孢子菌的生长规律及菌落形成过程。张元和等发现念珠菌、隐球菌等在含抗真菌药、胆汁、高张培基中可转变为形态迥异的L型,为提高体液内检出真菌提供信息。李安生等从鸽粪中分离出一株尿素酶阴性新型隐球菌,有一定致病性,因而提出尿素酶鉴定法的局限性。李竹青等以含BCG、GCP培基的生化分析对新型隐球菌作分型,所获结果与血清法相同,他总结我国临床株以A/D型为主(85%);B/C型次之(15%),与李安生等以8个因子血清检测的70株菌结论相同,即我国无C型新型隐球菌感染株。冉玉平等证实糠秕孢子菌的脂酶活性主要存在于胞壁与膜内,并镶嵌于葡聚糖骨架中,此酶的活性与菌增长尤其是与菌丝的产生密切相关,与菌的致病性也密切相关,当菌接触靶细胞膜后,酶即被活化而致病。胡晓莉等发现除石膏样毛癣菌可致毛发穿孔外,其它一些毛癣菌也具此特性,因而无鉴定意义。

  80年代开始,医学真菌领域也开始了分子生物学的研究,如对念珠菌7个种(林桦等)、红色毛癣菌(滕传远等)、糠秕孢子菌(赖维)及新型隐球菌(赵志强)的核DAN G+C mol%含量作测定可检查各菌碱基序列的异同,发现这对各菌的分类鉴定有一定价值。

  为了更好地对日益增多且致病性较强的医学真菌进行管理,并更好地发挥其在医教研中的作用,也更有利于国际间交流,1979年在全国科委领导下成立了中国微生物菌种保藏管理委员会医学真菌中心,挂靠于中国医学科学院皮肤病研究所,并与国际联机联网沟通情况,还在上海医科大学华山医院、北京医科大学第一附属医院,肿瘤医院及上海第二军医大学长征医院设立蛙粪霉菌及表皮真菌,着色真菌、产毒及条件致病真菌以及新型隐球菌专业实验室,分别由吴绍熙、秦启贤、王端礼、孙鹤龄、廖万清负责,从而使我国医学真菌的发展更有保证。

  二、真菌病的诊断方面

  在浅部真菌病的诊断中,以KOH溶解角蛋白的直接镜检及沙氏培养基为基础的培养方法和生化试验等对鉴定致病真菌仍起着重要作用。为继续完善上述方法,吴绍熙、朱一元、孙亦新等对鉴定白念珠菌具重要意义的厚膜孢子形成提出用大米、12.5%~

25%蛋清及微量元素硒、钼、镍、钴等可明显提高其形成率。还发现培养基中加入微量元素铯、镁等可诱发白念珠菌的芽管产生;铁、锰、铜、镁等可促进红色毛癣菌、石膏样毛癣菌及犬大分生孢子。冉玉平、李宇宁等以食用植物替代我国少见的橄榄油或加脂酶激活剂STC可增加及加速糠秕孢子菌的培养阳性率。李顺凡等以改良刚果红染色法在光镜下直接镜检可提高临床标本检测阳率从33.2%升至51.9%。此外,施秀明等以玉米吐温80与改良沙氏马铃薯培养基使不典型红色毛癣菌在短期内产色素及大量小分生孢子有助于该菌的鉴定。

  随着免疫学理论的发展,以抗原抗体反应为基础的免疫学测定法也陆续用于真菌病的诊断,弥补了直接镜检及培养等方法的不足,对提高深部真菌病的早期诊断率、治愈率和降低病死率起着重要作用。继建立了乳胶凝集和反向血凝法检测新型隐球菌多糖抗原(协和医院)来诊断新型隐球菌脑膜炎后,苏飞腾、李竹青、温海等相继建立了ABC酶联免疫法,双夹心ELISA法和放射免疫法等,从而对新型隐球菌荚膜多糖抗原的检出率达到国际同类研究水平(6.2~1.95ng/ml),且已应用于临床。吴绍熙、李秀凯等建立了白念珠菌免疫荧光及免疫酶标法,提高了白念珠菌感染的早期诊断率,程良金等将待检血清煮沸后用于双抗体夹心ELISA法检测,可提高对白念珠菌血甘露聚糖抗原的检出率。姜萍等也建立了免疫荧光快速诊断孢子丝菌病的方法,李若瑜等以血清凝集反应及外抗原试验法,对3种病原性黑酵母进行了初步试验,鉴于形态相似的皮炎万氏霉与外瓶霉间无交叉凝集反应,以凝集法可区别上述二菌,但甄氏瓶霉与棘状外瓶霉间却可交叉凝集,以外抗原试验法中可作鉴别。

  三、真菌病的治疗方面

  在抗真菌药物的研究方面,我国于50~60年代即研制四烯类制霉菌素,同时还筛选了大量中草药的抗真菌作用,研制成功了复方土槿皮酊,大蒜素等,现已列入中国药典。60年代初制成的国产灰黄霉素,曲古霉素曾广泛用于临床,为真菌病的防治作出了贡献。其后还研究出使灰黄霉素增效的中药对羟基苯乙酮,可节约50%的灰黄霉素。70年代起,我国先后制成了克霉唑、益康唑、庐山霉素、金褐霉素及二性霉素乙等。80年代又制成咪康唑、酮康唑、环吡酮胺、肟康唑等。90年代初更研制出氟康唑、硫康唑、丙烯胺类萘替芳和三并萘芬以及二性霉素乙脂质体、联苯苄唑等。虽然,其中多系引进国外信息或资料,但其工艺独特,产品质量与国外相同或更佳,为真菌病的治疗提供了有力武器,且大大缩短了与国际间的差距。

  鉴于真菌病常伴机体免疫紊乱,国外曾以转移因子治疗慢性念珠菌病而获效。我国郭宁如等也提出以抗真菌药辅以免疫调节剂治疗真菌病,确有成效,并从动物实验中证实,如以胸腺素或中药甘草甜素(可提高机体NK活性,T细胞产IL,及其它淋巴因子)单独用于系统致死量白念珠菌感染的小鼠,可使其病死率从100%降至50%。

  四、真菌病的防治方面

  头癣曾在我国长期流行,40年前,有些地区患病率高达1%以上。经广大皮肤科工作者的努力,深入现场防治研究,总结出在现场最大限度地发现头癣患者,分型论治及切断传播途径的污染物灭菌等系列经验,从而取得了一个公社、一个县乃至全地区、全省控制头癣流行的成果。据江西试点复查,头癣的患病率已从4%降至0.0009%。

  足癣也是我国的常见病,煤矿工人患病率可高达57.26%,经防治结合,总患病率已降至8.33%,经3年后复查,效果仍然巩固。从大规模防治研究中,还试制了将药物与衣物结合的防癣用具如防足癣用胶鞋、鞋垫、袜子等对巩固疗效,预防复发和再感染起到一定作用。

  五、其它方面

  宿主在感染真菌前后的免疫状态以及真菌感染的发病机理在我国研究得还不多,但从近年仅有的一些资料提示宿主的免疫功能存在紊乱。如郭宁如等对足癣患者检测T细胞、外周血多形核白细胞及Ig、C3、C4等,结果提示患者呈高度致敏状态。在深部真菌病如孢子丝菌及镰刀菌病中发现患者的调理功能弱(郭宁如)。吕昭萍、侯幼红等报告有念珠菌发病倾向者其口腔粘膜对白念的粘附有所增加、唾液IgA量降低。席丽艳等发现缺壁白念珠菌(L型)的致病性消失,但如留在体内可恢复至正常白念珠菌而又出现致病性,提示白念珠菌壁是致病的主要成分。

  随着分子生物学的发展,真菌分子生物学研究也开始深入,朱向阳、李春阳、梁龙等相继成功提取、克隆了念珠菌的特异DNA片断,并制成探针,分别以生物素,同位素标记建立了念珠菌DNA探针杂交鉴定法,较敏感而特异,是分子生物学与临床结合的端倪。同时还发现星形念珠菌与白念珠菌有交叉反应,与国外学者认为实为一菌的论点相符。刘维达等的研究了脉冲电泳对念珠菌隐球菌的分析。

  六、展望

  上述简短回顾,尤其是近10年来的成绩提示我国真菌学科40年来已有长足进步,限于篇幅,难免挂一漏万,展望即将来临的21世纪,真菌学的研究将更上一层楼。有关真菌病的发病机理将逐渐阐明,因此一些真菌病有可能得到控制。随着分子生物学技术的广泛应用,对真菌病的诊断将更精确,更快速而简便,这些都将对临床防治起促进作用。但随着我国国际交流的频繁,人民生活习惯和微生态的改变,尤其是人们免疫状态的改变,某些真菌病将有增加的趋势,例如随着宠物的增加,人畜共患真菌病如犬小孢子菌病等有可能继续增多,某些严重的真菌病亦有可能从国外传入,新的真菌种将会感染人体而继续被发现,这些都是对我们的挑战。相信我国皮肤科工作者工作者将继续努力,乘胜前进,在新的世纪中取得更大的成绩,为人类作出贡献。

摘自:吴绍熙 (中国医学科学院皮肤病研究所,南京,210042)
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